Sản xuất vaccine : VACCINE BẠI LIỆT BẤT HOẠT TỪ CHỦNG SABIN

Đặt vấn đề

Tỷ lệ mắc bệnh bại liệt ở Việt Nam

Tỷ lệ mắc bệnh bại liệt ở Mỹ

BỆNH BẠI LIỆT

qNguyên nhân : Virus Poli

qNguồn truyền nhiễm:

üNgười là nguồn chứa duy nhất, lây truyền chủ yếu qua đường phân –miệng.

qCơ thể cảm thụ:

üTuổi hay gặp là trẻ em 2-8 tuổi, đặc biệt 2-4 tuổi chiếm 60-80%.

CƠ CHẾ SINH BỆNH

VIRUS BẠI LIỆT (poliovirus)

Polio virus có hình cầu với cấu trúc 20 mặt, đường kính khoảng 30nm trọng lượng phân tử 6,8 x 106 dalton. Genom là sợi RNA đơn dương.

Bao bọc xung quanh lõi RNA là một vỏ capsid. Capsid bao

gồm 60 capsome giống nhau, xếp đối xứng, mỗi capsome được cấu tạo bởi một trong 4 chuỗi polypeptid là VP1, VP2, VP3,

VP4

VIRUS BẠI LIỆT (poliovirus)

qCó 3 type kháng nguyên khác nhau và không gây miễn dịch chéo.

üType I: Điển hình là chủng Brunhilde.

üType II: Điển hình là chủng Lansing.

üType III: Điển hình là chủng Leon.

Trong đó type I là nguyên nhân chính của các vụ dịch lớn chiếm 80-90%. Trong khi đó , type II và III gặp ít hơn tùy theo từng nước và từng vùng địa lí khác nhau

SẢN XUẤT VACINE BẠI LIỆT IPV

GÂY NHIỄM

§Mỗi typ virus được pha trong môi trường LH3E( hoặc EAGLE glucose cao, M199 glucose cao), theo liều gây nhiễm
1 CCID50/300 tế bào.

§Hấp phụ 1 giờ ở 33 độ C.

§Ủ ở 330C- 33,50C , £ 72 giờ.

§Kiểm tra hiệu giá.

Quá trình cô đặc và tinh chế virus

bước 1:Sinh khối virus

bước 2: Lọc qua hệ thống siêu lọc Vivaflow

bước 3 :Cô đặc bằng siêu ly tâm

bước 4 :Tinh chế qua cột DEAE Sepharose CL-6B

Sản phẩm sau tinh chế: kháng nguyên bại liệt đã tinh sạch

Lọc virus bằng hệ thống lọc
tiếp tuyến Vivaflow

Quá trình siêu lọc loại bỏ một số thành phần muối vô cơ, các axit amin phân tử nhỏ, các

mảnh nhỏ của xác tế bào, nước có trọng lượng phân tử nhỏ

hơn 100.000 dalton vừa làm

cho hỗn hợp dịch đặc lại đồng thời loại bỏ một số protein tạp

QUÁ TRÌNH CÔ ĐẶC VÀ TINH CHẾ
KHÁNG NGUYÊN BẰNG SIÊU LY TÂM

•Ly tâm 36.000 rpm/60C/4 giờ, cặn được hòa vào dung dịch PB 0,1M để lắc nhẹ qua đêm ở 40C. Sử dụng siêu âm phá tế bào và làm tách rời các hạt virut.

•Ly tâm 15.000 rpm/6oC/30 phút

Lấy mẫu kiểm tra hiệu giá sau siêu ly tâm

Bất hoạt 3 typ kháng nguyên

•Bất hoạt dùng formalin theo tỷ lệ 1:4000. Ngâm trong bể điều nhiệt 370C trong 12 ngày. Kiểm tra bại liệt sống để xác định ngày thứ bao nhiêu thì bị bất hoạt hoàn toàn.

•Trung hòa formalin khi bất hoạt kết thúc.

• Vaccine được tinh chế và bất hoạt sẽ được kiểm tra độ bất hoạt và xác định kháng nguyên D, kiểm tra vô trùng và thử nghiệm nhận dạng.

PHỐI TRỘN VACCINE

•Công thức thứ nhất:

üTyp 1 và Typ 2 :30 đơn vị kháng nguyên D (Du)

üTyp 3 :50 đơn vị kháng nguyên D (Du)

•Công thức thứ 2:

üTyp 1 :3 đơn vị kháng nguyên D

üTyp2 và typ 3 : 100 đơn vị khán nguyên D.

• Dung dịch pha loãng là M199 không có ion Ca2+, Mg2+, PO42- không chỉ thị màu chất bảo quản là 2-phenoxyethanol 0,5% (0,005 ml/ml)

•Lọc vô trùng và đóng lọ. pH= 7,1à 7,3.

•Bảo quản từ 4-80C